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无创性产前诊断胎儿遗传物质

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     起首,阐明胎儿的存在下的DNA在母体血浆和血清。 无细胞DNA所提供的胎儿遗传物质的新泉源,无创性产前诊断。 他们开辟了一种及时,定量的PCR聚合酶链反响(PCR)沙龙娱乐办法来丈量的胎儿DNA的浓度和剖析SRY ,一个单拷贝的Y染色体特异性序列,来量化基因组当量的每毫升血液 的数目当妇女携带男性胎儿。
  后果标明,在母体血浆的DNA的胎儿DNA中的第一个和第三个三个月的浓度辨别为3.4%和6.2% 。 他们估量均匀为25.4份每母体血浆样本毫升胎儿DNA循环的晚期怀胎。 他们还标明,临盆后,无细胞胎儿DNA从母体循环中肃清 十分敏捷,具有半衰期在分钟(3)的次序。 因而,绝对高浓度的胎儿无细胞的DNA标明,母体血浆用于诊断目标运用胎儿DNA时普遍而耗时的胎儿DNA的富集顺序就没有须要。
  固然胎儿无细胞的DNA剖析的胎儿男女和恒河猴D情况的产前诊断的潜力已被提出,产前诊断的精确性还没有被描绘。 假如胎儿男女可确定的,以测定X连锁遗传病侵入性操纵的数量会增加。 本研讨评价了运用从怀胎晚期取得母体血浆游离DNA胎儿判定诊断的精确性。
  母体血液样品(10mL)中搜集到含管的EDTA 离心30008在3小时内停止别离。 血浆转移到平凡的聚丙烯管中,并经过离心30008.再 次别离上清液搜集到新管中并保管在-20℃下直到进一步处置。 DNA从1.5毫升运用依据“血液和??体液协议”稍加修正的QIAamp血液 迷你试剂盒(Qiagen)停止血浆样品的提取。 DNA从柱中洗脱,用50微升的水。 固然运用ABI PRISM 7700序列检测仪(Applied Biosystems)对母体血浆的DNA剖析及时定量PCR测定已报道一些研讨者 ),我们运用了的LightCycler(Roche Diagnostics公司),其是DNA的定量的牢靠沙龙娱乐办法。 在Y染色体特异性序列,DYS-14, 在男性胎儿被用作分子标志停止量化的胎儿细胞的DNA。 在PCR反响体系为DYS-14序列构成的扩增引物DYS 14-713F(5'-CAT  CCA CGT CCC 和DYS14-880R(5'-TTC CCC TTT GTTGTT葡萄糖耐量实验,看有CCC CAA 和双重标志的荧光探针DYS14-883T(5'-FAM-CGA AGC CGA GCT GCC CAT CA-TAMRA-3')。 的荧 光PCR反响依照制造商的在20微升反响体积与除从试剂组失掉(的LightCycler-疾速起动的DNA站长荧光探针和扩增引物的一切组分 的阐明制备杂交 探头; 罗氏诊断)。 所提取的血浆DNA(13.1微升)用作各反响的模板。 热循环开端时,接纳变性 在95℃下停止 10分钟,接着变性的40个循环,在95℃下停止10秒,退火57 [度]下停止20秒,延伸72℃下停止20秒。 雄性存在于血浆样品中的 DNA的拷贝数经过用的雄性基因组DNA的校准浓缩曲线停止比拟来确定。
  该DYS14序列的拷贝经过用延续浓缩,男性基因组DNA的规范曲线比拟来确定。 的干系是线性的时,阈值循环作图对输出目的量,后 者绘制在一个配合的对数刻度。 校准曲线的相干系数为0.956?1.000。 从DNA的提取,随后经过定量PCR启动零碎的盘算出的一天 到一天的CV为5.3%(N = 7)。 我们添加了男性DNA(6.6纳克的全血DNA)的1000拷贝数到非怀胎妇女和提取后评价DNA接纳的血浆 。 男性DNA的接纳率均匀为66.0%。
  从这些的孕妇的血浆样品停止重新剖析的后果绝对应的准确的胎儿的性别。
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